細胞線粒體分離試劑盒使用說明！

線粒體是細胞呼吸的主要場所，細胞活動所需的能量主要由在線粒體內進行的氧化所產生的能量來供應。制備線粒體的關鍵是保持線粒體的完整性和純度，可通過分級分離法獲得，即先低俗出去細胞核以及細胞碎片，再進行高速梯度離心分離線粒體。

產品名稱：細胞線粒體分離試劑盒

產品規格：50T

儲存條件：-20℃,12個月

產品組成：試劑(A): Mitochondria Lysis buffer     試劑(B): Wash buffer     試劑(C): Mitochondria Stock buffer   

                 試劑(D): Protein Stock buffer(5×)       試劑(E): PMSF(100×)

細胞線粒體分離試劑盒(Cell Mitochondria Isolation Kit)是快速便捷分離培養細胞中的線粒體的試劑盒，分離線粒體的同時可以獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，可用于分析細胞 色素 C等線粒體蛋白向胞漿的釋放，大部分獲得的線粒體都含有完整的內膜和外膜，并具有線粒體的生理功能(如檢測線粒體膜電位)，獲得的蛋白可用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。

實驗步驟{僅供參考）

1、清洗：用預冷的PBS清洗細胞1次，4°C1000g離心5min，棄上清。

2、裂解：沉淀用1～2ml預冷的Mitochondria Lysis buffer重懸細胞，冰浴放置10～15min，可用相差顯微鏡檢測膨脹的程度。

3、勻漿：把細胞懸液轉移至Dounce勻漿器中，勻漿10～20次。不同細胞或不同勻漿器所需的勻漿次數有所不同，需自行優化。

4. 取勻漿液，立即加入等量Wash buffer，輕輕顛倒混勻數次取勻漿液，立即加入等量Wash buffer，輕輕顛倒混勻數次取勻漿液，立即加入等量Wash buffer，輕輕顛倒混勻數次取勻漿液，立即加入等量Wash buffer，輕輕顛倒混勻數次

5、4°C1300g離心5min以去除細胞核、未破碎的細胞和大的膜碎片。

6、上清液轉移至一干凈離心管，4°C1000g離心5min，重復2次。

7、上清液轉移至一干凈離心管，4°C12000～15000g離心15min，重復1次。

8、棄上清，沉淀為線粒體。如果希望獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，應在本步驟中收集上清，并且在收集上清時注意勿觸及沉淀，隨后把收集的上清12000g4°C離心10min，上清即為去除線粒體的細胞漿蛋白。

9、保存：棄上清，用適當緩沖液懸浮沉淀。如果用于線粒體酶活性或功能的分析，線粒體沉淀應重懸于Mitochondria Stock buffer；如果用于細胞漿蛋白的分析，獲得的細胞漿蛋白應保存于1×Protein Stock buffer，即按細胞漿蛋白：Protein Stock buffer (5×)=4：1比例混合；如果用于雙向電泳，應使用恰當的保存液。

本產品僅供科研實驗用，不做其它用途！