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詳情介紹
| 產品名稱： | 大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)elisa試劑盒 | ||||||
| 英文名稱： | Rat AMPK (Phosphorylated Adenosine Monophosphate Activated Protein Kinase) elisa Kit | ||||||
| 規格： | 48T/96T | ||||||
| 產品保質期： | 6個月 | ||||||
| 保存條件： | 2-8度 | ||||||
| 該試劑盒操作原理： | |||||||
| 本試劑盒含量是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系 | |||||||
| 我們在做ELISA實驗的時候，通常選取血液樣本為我們的代測樣本，具體收集方法如下： | |||||||
| 血液樣本的收集： 全血根據收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。 | |||||||
| 大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)elisa試劑盒 | |||||||
| 我們在選擇抗凝劑的時候，有幾點需要注意的： | |||||||
| ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要*，同時所取的全血的量也要盡量*; ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固; ③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）; ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后 用于測定。 | |||||||
| 組織樣本也是我們經常使用到的，動物組織樣本的前處理，勻漿方法如下： | |||||||
| 動物組織樣本的前處理: 1、取組織塊（0.1g～0.2g）在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，準確稱重，放入勻漿管中。 2、按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質（使用0.86%的生理鹽水）于勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。 3、勻漿的方式有多種：手工勻漿，機器勻漿，超聲粉碎。 ①、手工勻漿：將玻璃勻漿管置于冰水浴條件下，手動勻漿，30秒/次，間隔30秒，重復6～8次，制成10%的勻漿液。 ②、機器勻漿：用機械式勻漿機（組織搗碎機或內切式勻漿機），8000～10000轉/分，冰水浴條件下，10秒/次，間隙30秒，連續3～5次。（皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間） ③、超聲粉碎：用超聲粉碎機進行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎，也可用國產超聲波發生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復3～5次。 鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片，顯微鏡下觀察細胞是否破碎，若沒有則可延長勻漿時間。 4、將制備好的10%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機2500轉/分左右,離心10～15分鐘，取上清液進行測定.（測定相應指標的同時需測一下相應樣本的蛋白濃度，總蛋白測試盒本所有售） | |||||||
| 大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)elisa試劑盒 | |||||||
| 我們銷售的試劑盒的具體操作簡單的特點，具體步驟如下（試劑盒已經包含了所有試劑，自備儀器為酶標儀，洗板機，溫育箱，移液器）： | |||||||
| 1. 加樣：標準品設定5個濃度點10個孔，每個濃度設定平行孔，加入50微升不同濃度的標準品，空白孔設定1個孔加入50微升蒸餾水（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔，在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 | |||||||
| 2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 | |||||||
| 3. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。 | |||||||
| 4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 | |||||||
| 5. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 | |||||||
| 6. 溫育：操作同3。 | |||||||
| 7. 洗滌：操作同5。 | |||||||
| 8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. | |||||||
| 9. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 | |||||||
| 10. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 | |||||||
| 大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)elisa試劑盒 | |||||||
| 我們銷售的試劑盒性能穩定： | |||||||
| 試劑盒性能我們是通過幾個數值反應的：1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990以上。2.批內與批間分別小于9%和11% | |||||||
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