重組核心鏈霉親和素的應(yīng)用

品 名：重組核心鏈霉親和素 4（ r-cSA4）
英文名稱：Recombinant Core Streptavidin 4
規(guī) 格：1 mg ，10 mg ，100 mg ，500 mg
產(chǎn)品形式：冷凍干粉（5mM 磷酸鉀鹽緩沖液、海藻糖，pH 7.4）
分 子 量：四聚體 55.2kDa，單體 13.8kDa
活 性：≥16 U/mg 蛋白（Green 改良法測定）
純 度：≥95%（SDS-PAGE 檢測）
濃度測定：紫外吸收法，消光系數(shù) E(0.1% at 280 nm)=3.042
來 源：大腸桿菌發(fā)酵工程菌株
保存條件：-20℃保存
有 效 期：1年
相關(guān)介紹：
鏈霉親和素（Streptavidin，SA）是阿維丁鏈霉菌（Streptomyces avidinii）在生長過程中分泌的一 種同型四聚體蛋白。同親和素一樣，一摩爾的鏈霉親和素可以結(jié)合四摩爾的生物素，與生物素具有 很高的親和力。由于 SA 不含糖基且等電點(diǎn)接近于中性，因此 SA 在檢測應(yīng)用中具有比親和素更低的 非特異性結(jié)合水平。富氨基重組核心鏈霉親和素與天然鏈霉親和素相比，去除與活性無關(guān)的序列， 僅保留與活性有關(guān)的核心序列，穩(wěn)定性、溶解性等方面均優(yōu)于天然鏈霉親和素。并對序列做了修飾， 增加了氨基的含量，提高了與配體或者磁珠以氨基方式偶聯(lián)的效率(該產(chǎn)品pI：8.93)。
該制品已被廣泛應(yīng)用于多種生物技術(shù)領(lǐng)域，諸如：包被免疫檢測用微孔板，制備 SA 偶聯(lián)酶制 劑，SA 偶聯(lián)熒光素、SA 偶聯(lián)磁珠等，進(jìn)而參與酶聯(lián)免疫吸附和酶催化放大實(shí)驗(yàn)，免疫組化化學(xué)、 生物分子純化、生物傳感器、生物納米微球、預(yù)靶向制藥研究和生物芯片被料等。
使用方法：（僅供參考）
由于產(chǎn)品生產(chǎn)工藝中凍干環(huán)節(jié)會引入保護(hù)劑等，為減少您的實(shí)驗(yàn)誤差，建議先通過內(nèi)部檢測方 法，產(chǎn)品中蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確定量后，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，并按實(shí)際情況進(jìn)行產(chǎn)品用量調(diào)整。建議優(yōu)先選 擇紫外吸收法進(jìn)行定量，方法如下：
將樣品從低溫條件下拿出后，平衡至室溫，并擦去瓶外附著的冷凝水，小心打開瓶蓋，防止干 粉飛濺損失。用去離子水或緩沖液進(jìn)行復(fù)溶，充分溶解后，稀釋至合適濃度，小心移入比色皿中， 以去離子水或緩沖液為空白對照，測定樣品在 280 nm 處的吸光值（建議吸光值控制在 0.1-1.5 區(qū)間內(nèi)），將其代入以下公式計算蛋白質(zhì)濃度：
式中：C：樣品原液的蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度（mg/mL）
A280nm ：蛋白質(zhì)溶液在 280nm 處測得的吸光值 N：稀釋倍數(shù)
E(0.1% at 280nm) ：1 mg/mL 蛋白質(zhì)的消光系數(shù)
例如將本產(chǎn)品凍干粉充分溶解并混勻后，取適量原液稀釋 10 倍，測得其在 280 nm 處的吸光值為 0.9126，則原液的蛋白濃度為 10×0.9126/3.042=3 mg/mL。
注意事項(xiàng)：
1. 鏈霉親和素凍干粉易溶于水，溶解性可達(dá) 10 mg / mL 或更高；

2. 建議使用純水溶解；
3. 如有未溶解物質(zhì)，建議延長復(fù)溶時間。也可以通過離心或其他方式除去不溶物后，再用于后 續(xù)實(shí)驗(yàn)，不會對總蛋白產(chǎn)生很大的影響。
4. 考慮到蛋白質(zhì)特殊性，凍干粉建議現(xiàn)用現(xiàn)配，溶解后應(yīng)避免反復(fù)凍融，如需多次使用，建議 按需分裝后凍存（-20℃) ;避免在4℃下長期存放。