產(chǎn)品說(shuō)明：

SDH（EC 1.3.5.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。SDH是線粒體的一種標(biāo)志酶，位于線粒體

內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶，是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外，為多種原核細(xì)胞產(chǎn)能的呼吸鏈提

供電子。

SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過(guò)吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），

并且在600nm處具有特征吸收峰，通過(guò)600nm吸光度的變化，測(cè)定2,6-DCPIP的還原速度，代表SDH酶活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者

增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

 

 

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

SDH 活性的計(jì)算

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。
SDH活性（U prot）=[（ΔA測(cè)定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反總×10
9]÷(Cpr×V樣) ÷T
=1555.556×（ΔA測(cè)定-ΔA空白）÷Cpr
（2） 按樣本質(zhì)量計(jì)算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。
SDH活性（U/g 質(zhì)量）=[（ΔA測(cè)定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反總×10
9]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=1571.111×（ΔA測(cè)定-ΔA空白）÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。
SDH活性（U/10
4 cell）=[（ΔA測(cè)定-ΔA空白）÷(ε×d)×V反總×10
9]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T
=3.142×（ΔA測(cè)定-ΔA空白）
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.98×10
-3L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，21×10
3L/mol/cm；d：比色皿光徑，
1cm；V樣：加入樣本體積，0.03mL；V樣總：加入試劑一和試劑二體積，1.01mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣
本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)；10
9：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1mol=109nmol。