去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒使用方法！

本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞，根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的 DNA 的原理特異性提取質(zhì)粒 DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能、專一地吸附 DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。

本公司研制的內(nèi)毒素清除劑，可大限度地除去內(nèi)毒素。從 1-5ml 大腸桿菌 LB培養(yǎng)液中，可快速提取 5-15μg 高純度質(zhì)粒 DNA，提取率達(dá) 85-90%。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒 DNA 純度高，可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染等要求較高的實(shí)驗(yàn)，以及其他各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。

操作方法：

1、取 1-5ml 細(xì)菌培養(yǎng)物，12000rpm 離心 1min，吸除上清（菌液濃度較低時(shí)可多次離心收集到一個(gè)離心管中）。
2、向留有菌體沉淀的離心管中加入 200μl 溶液 P1(請先檢查是否已加入 RNaseA），使用移液器或旋渦振蕩器*懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。注意：如果菌塊未*混勻，會影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。
3、向離心管中加入 200ul 溶液 P2，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以免污染細(xì)菌基因組 DNA，此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠，作用時(shí)間不要超過 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。

去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒使用方法！

使用注意：

1. 使用前請先檢查溶液 P2、P3 和 P4 是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。
2. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50ul，體積過小影響回收效率；洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)， pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。
3. 質(zhì)粒 DNA 濃度＞1mg/ml 時(shí)清除內(nèi)毒素效率降低。由于質(zhì)粒 DNA 本身的性質(zhì)，清除過程可導(dǎo)致部分質(zhì)粒 DNA丟失，但內(nèi)毒素卻能得到大限度清除。
4. 所有溶液應(yīng)用無內(nèi)毒素的高純水配制，所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素，玻璃器皿可高溫烘烤，非揮發(fā)性水溶液可高壓處理。
5. DNA 濃度及純度檢測：得到的質(zhì)粒 DNA 純度與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。 DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰，OD260 值為1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、 40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因?yàn)?pH 值和離子存在會影響吸光值，但并不表示純度低。

去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒使用方法！